校准紫外分光光度计一般可从波长、吸光度、杂散光、基线等方面进行,以下是具体步骤:
波长校准
预热仪器:接通电源,打开仪器开关,预热 30 分钟以上,使仪器达到稳定的工作状态。
选择标准物质:常用的波长校准标准物质有钬玻璃、镨钕玻璃等。
放入样品:将选好的标准物质放入样品池中,放入样品室的特定位置。
扫描测量:设置波长扫描范围,启动扫描,记录标准物质的吸收光谱。
对比与校准:将仪器测量出的特征吸收峰波长与标准波长值对比,若有偏差,根据仪器操作说明调整波长校准旋钮或使用软件校准功能,使测量值与标准值相符。
吸光度校准
准备标准溶液:如重铬酸钾标准溶液,按照标准方法配制不同浓度的系列标准溶液,一般至少配制 3 个不同浓度点。
设置测量条件:根据测量需求,设置好波长、狭缝宽度、扫描速度等测量条件。
测量吸光度:以空白溶液为参比,依次测量不同浓度标准溶液的吸光度,每次测量前用空白溶液进行归零操作。
绘制校准曲线:以标准溶液浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制校准曲线。曲线应具有良好的线性关系,相关系数一般应达到 0.999 以上。
验证吸光度准确性:用已知浓度的标准溶液进行验证,测量其吸光度并通过校准曲线计算浓度,与实际浓度对比,偏差应在允许范围内。
杂散光校准
准备试剂或滤光片:紫外区可选用碘化钠溶液,可见区可选用亚硝酸钠溶液,也可使用截止滤光片。
设置波长:将仪器波长设置为需要检测杂散光的波长,如紫外区的 190nm 或可见区的 800nm 等。
测量吸光度:将装有试剂或滤光片的样品池放入仪器样品室,测量其在设定波长下的吸光度。
评估杂散光水平:根据仪器的技术指标和相关标准判断杂散光是否超标,若吸光度值超过规定上限,需检查和调整仪器。
基线校准
清空样品室:确保样品室内无任何物品,关闭样品室盖。
设置扫描参数:设置合适的波长范围和扫描速度等参数,一般扫描范围应覆盖实际使用的波长区间。
扫描基线:启动基线扫描功能,仪器自动扫描并记录基线信号,绘制出基线曲线。
检查基线质量:理想的基线应是平滑直线,无明显波动或起伏,否则需重新扫描或检查仪器光路、光源等部件。
不同型号的紫外分光光度计在具体操作上可能会有所差异,校准过程中应严格按照仪器的操作手册进行。同时,校准工作应由专业人员或经过培训的人员进行,以确保校准的准确性和可靠性。
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