荧光光谱仪是用于分析物质荧光特性的精 密仪器,其核心组成部分通常包括以下几个模块,各部分协同工作以实现荧光信号的激发、检测和数据处理:
一、激发光源
作用:提供特定波长的激发光,使样品分子产生荧光。
常见类型:
氙灯:发射连续光谱(200~800 nm),适用于宽范围激发,稳定性高,常用于稳态荧光光谱仪。
汞灯:发射线光谱(如 254 nm、365 nm 等紫外光),早期仪器常用,现逐渐被氙灯或 LED 替代。
激光器:提供单色、高强度激发光(如固体激光器、半导体激光器),适用于时间分辨荧光或高灵敏度检测。
LED 光源:低功耗、长寿命,波长范围可调(如紫外、可见 LED),适用于便携或微型荧光仪器。
关键参数:波长范围、光强度、稳定性、使用寿命。
二、激发单色器(激发单色仪)
作用:从光源发出的复合光中筛选出特定波长的激发光,调节激发波长。
核心组件:
色散元件:
光栅:利用光的衍射原理进行分光,分辨率高,波长范围宽。
棱镜:利用光的折射原理分光,适用于紫外 - 可见波段,但分辨率低于光栅。
狭缝:调节出射光的带宽(狭缝宽度越小,单色光纯度越高,但光强降低)。
驱动系统:通过电机或手动旋钮调节波长,实现扫描功能。
功能:支持波长扫描(如全波段扫描以确定zui佳激发波长)。
三、样品室
作用:放置样品,确保激发光与样品充分作用,并收集样品发射的荧光。
设计要点:
光路结构:
直角光路:激发光与检测荧光呈 90° 夹角,避免激发光直接进入检测器(减少背景光干扰),zui常见。
同轴光路:激发光与荧光沿同一光路传输,适用于光纤传导或特殊样品(如粉末、薄膜)。
样品池:
材质:紫外波段需用石英比色皿(玻璃吸收紫外光),可见光波段可用玻璃或石英。
形状:常见方形(光程准确),需保持清洁,避免指纹或污渍影响透光率。
温控装置(可选):部分仪器配备恒温样品架,用于温度敏感样品的荧光特性研究。
四、发射单色器(发射单色仪)
作用:分离样品发射的荧光信号,筛选出特定波长的荧光进行检测,或扫描全波段荧光光谱。
结构与原理:与激发单色器类似,由光栅 / 棱镜、狭缝、驱动系统组成,但针对荧光波长范围(通常长于激发波长)优化。
功能:
扫描荧光发射光谱(固定激发波长,改变发射波长)。
选择特定波长的荧光进行定量检测(如荧光强度测定)。
五、检测器
作用:将荧光信号转换为电信号,并放大、记录。
常见类型:
光电倍增管(PMT):
高灵敏度(尤其适用于弱荧光检测),响应速度快,光谱范围覆盖紫外 - 可见波段(约 180~900 nm)。
需高压电源驱动,存在一定噪声,长时间使用可能老化。
电荷耦合器件(CCD):
可同时检测多波长荧光(适用于快速光谱采集),量子效率高,动态范围宽。
常用于成像型荧光光谱仪或微型光谱仪。
雪崩光电二ji管(APD):
高灵敏度,尤其适用于近红外波段(如近红外荧光检测),响应速度ji快(适合时间分辨测量)。
关键参数:灵敏度、光谱响应范围、噪声水平、线性动态范围。
六、信号处理与控制系统
作用:控制仪器各部件协同工作,处理检测信号并输出结果。
组成部分:
硬件控制:
驱动单色器电机、光源触发、检测器增益调节等。
支持扫描模式(如激发光谱、发射光谱、同步扫描)和固定波长测量模式。
数据处理:
光谱校正(如暗电流校正、光谱响应校正)、基线扣除、峰值分析。
定量分析(如标准曲线法、比率法)、动力学分析(荧光衰减曲线)。
软件界面:
图形化操作界面(如 LabVIEW、专用控制软件),支持数据存储、导出(如 CSV、TXT、图片格式)及报告生成。
七、辅助部件
滤光片组:
激发滤光片:进一步筛选激发光(如窄带通滤光片,用于固定波长激发)。
发射滤光片:阻挡激发光散射光,仅允许荧光通过(如长波通滤光片),降低背景噪声。
参比光路(部分高 端仪器):
用于校正光源强度波动或检测器漂移,提高测量精度(如双光束荧光光谱仪)。
光纤附件(可选):
用于非接触式测量(如远距离样品、微型样品池),扩展仪器应用场景(如荧光显微、在线监测)。
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