荧光显微镜(fluorescent microscope)是以各种特定波长光源激发生物标本中的荧光物质,产生各种可见颜色荧光的一种显微镜。荧光显微镜一般采用高压汞灯和弧光灯作为光源,在光源和反光镜之间放一组滤色片以产生特定波长的激发光,光谱一般从紫外到红外,从而激发各种荧光物质产生不同波长的发射光。利用荧光显微镜可研究荧光物质在组织和细胞内的分布,以达到对细胞的特定物质进行定性、定位和定量观察的目的。与生物学有关的荧光现象有三种:
⑴ 自发荧光通过激发光会使物体发出荧光,如叶绿素、维生素A等。
⑵ 诱发荧光通过诱导剂作用而发的荧光,如甲醛蒸气处理可诱发细胞和组织中生物单胺类产生荧光。
⑶ 荧光染料染色荧光例如吖啶橙可以对细胞DNA、RNA同时染色,显示不同颜色的荧光,DNA呈绿色荧光,RNA呈橙色荧光。荧光染料可和抗体共价键结合,这种标记的抗体再和相应的抗原结合形成抗原抗体复合物,经激发后发射荧光进行抗原定位。
由于荧光显微镜技术染色简便、敏感度高而且图像色彩鲜明,所以是目前对特异蛋白质等生物大分子定性、定位的有力的工具。