紫外分光光度计的校准通常包括波长准确性、吸光度准确性、杂散光等指标的校准，以下是一般的校准步骤：

波长准确性校准

准备工作：确保仪器预热足够时间，一般为 30 分钟至 1 小时，以使仪器达到稳定状态。准备好已知波长的标准光源或标准样品，如汞灯、镨钕滤光片等。

设置仪器：将仪器的波长扫描范围设置为需要校准的波长区间，通常为紫外可见光区域，如 200 - 800nm。

测量波长：使用汞灯作为光源时，记录汞灯特征谱线的波长，如 253.7nm、365.0nm、404.7nm、435.8nm 等。将镨钕滤光片放入样品池中，测量其吸收峰的波长。

比较与调整：将测量得到的波长值与标准波长值进行比较，若偏差超出允许范围（一般为 ±1 - 2nm），则需要通过仪器的波长校准功能进行调整。

吸光度准确性校准

准备标准溶液：选择合适的标准物质，如重铬酸钾、硫酸铜等，按照标准方法配制一系列不同浓度的标准溶液。

设置测量条件：根据标准溶液的性质和测量要求，设置仪器的波长、带宽、扫描速度等参数。

测量吸光度：以空白溶液为参比，依次测量不同浓度标准溶液的吸光度。

绘制标准曲线：以标准溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。计算相关系数，评估标准曲线的线性度。

比较与调整：将测量得到的吸光度值与标准曲线进行比较，若偏差超出允许范围（一般为 ±0.005 - 0.01Abs），则需要检查仪器的光路系统、探测器等部件，进行必要的调整和校准。

杂散光校准

准备样品：通常使用含有高浓度碘化钠或亚硝酸钠的溶液作为杂散光测试样品。

设置测量条件：将仪器的波长设置为需要测试的波长，一般选择在紫外区的短波端，如 220nm 或 230nm。

测量杂散光：将样品池放入仪器中，测量样品在该波长下的透光率。杂散光的计算公式为：杂散光（%）=（1 - 透光率）×100%。

比较与调整：将测量得到的杂散光值与仪器的技术指标进行比较，若超出允许范围（一般为≤0.1% - 0.5%），则需要检查仪器的光学系统，如反射镜、透镜等是否有污染或损坏，进行清洁或更换部件。

基线校准

打开仪器电源：预热仪器，让仪器达到稳定的工作状态。

设置波长范围：根据需要测量的样品的吸收波长范围，设置仪器的波长扫描范围。

放入空白样品：将装有空白溶剂（如蒸馏水、乙醇等，根据样品的溶剂选择）的比色皿放入样品池中，作为参比样品。

扫描基线：启动仪器的基线扫描功能，仪器将在设定的波长范围内扫描空白样品的吸光度，得到一条基线。理想情况下，基线应该是一条平坦的直线，吸光度值接近零。

稳定性校准

长时间运行测试：让仪器连续运行数小时，一般为 4 - 8 小时。在运行过程中，每隔一定时间（如 30 分钟或 1 小时）测量一次空白样品或标准样品的吸光度。

观察吸光度变化：记录每次测量的吸光度值，观察吸光度的波动情况。计算吸光度的标准偏差或相对标准偏差，评估仪器的稳定性。一般要求仪器在长时间运行过程中，吸光度的波动范围不超过 ±0.005 - 0.01Abs。

       以上是紫外分光光度计校准的一般步骤，不同型号和品牌的仪器可能会略有差异。在进行校准时，应严格按照仪器的操作手册进行操作，并使用经过计量认证的标准物质和标准仪器。校准工作应由专业人员或经过培训的人员进行，校准后应填写校准记录和报告，并存档。

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